Muestras:
- 24-2-0297 à BOX 367
- 24-2-0480 à BOX 374
Protocolo:
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Diluir los sueros:
- Subclases: diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
- Titulación: diluir sueros a 1/100, 1/300, 1/900, 1/2700, 1/8100 y 1/24300 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
- Incubar con los sueros 1h a RT
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Ac secundarios:
- Screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
- Subclases: Incubar con IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-570 nm
Plantilla placa:
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
Cneg | 24-2-0480 1/900 | 24-2-0480 G1 | 24-2-0297 1/100 | 24-2-0297 1/8100 | 24-2-0297 G1 |
Cneg | 24-2-0480 1/900 | 24-2-0480 G1 | 24-2-0297 1/100 | 24-2-0297 1/8100 | 24-2-0297 G1 |
Cpos NF186 | 24-2-0480 1/2700 | 24-2-0480 G2 | 24-2-0297 1/300 | 24-2-0297 1/24300 | 24-2-0297 G2 |
Cpos NF186 | 24-2-0480 1/2700 | 24-2-0480 G2 | 24-2-0297 1/300 | 24-2-0297 1/24300 | 24-2-0297 G2 |
24-2-0480 1/100 | 24-2-0480 1/8100 | 24-2-0480 G3 | 24-2-0297 1/900 | 24-2-0297 G3 | |
24-2-0480 1/100 | 24-2-0480 1/8100 | 24-2-0480 G3 | 24-2-0297 1/900 | 24-2-0297 G3 | |
24-2-0480 1/300 | 24-2-0480 1/24300 | 24-2-0480 G4 | 24-2-0297 1/2700 | 24-2-0297 G4 | |
24-2-0480 1/300 | 24-2-0480 1/24300 | 24-2-0480 G4 | 24-2-0297 1/2700 | 24-2-0297 G4 |
Resultado:
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
A | 0,024 | 0,103 | 0,047 | 0,046 | 0,015 | 0,017 |
B | 0,031 | 0,018 | 0,018 | 0,034 | 0,007 | 0,02 |
C | 0,478 | 0,055 | 0,025 | 0,023 | 0,015 | 0,042 |
D | 0,046 | 0,018 | 0,022 | 0,028 | 0,012 | 0,036 |
E | 0,225 | 0,027 | 0,017 | 0,018 | 0 | 0,021 |
F | 0,031 | 0,017 | 0,016 | 0,029 | 0 | 0,022 |
G | 0,027 | 0,021 | 0,018 | 0,021 | 0 | 0,02 |
H | 0,022 | 0,021 | 0,018 | 0,022 | 0 | 0,021 |