Muestras:
- 24-2-0479 –> BOX 374
- 24-2-0482 –> BOX 374
Protocolo:
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Diluir los sueros:
- Subclases: diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
- Titulación: diluir sueros a 1/100, 1/300, 1/900, 1/2700, 1/8100 y 1/24300 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
- Incubar con los sueros 1h a RT
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Ac secundarios:
- Screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
- Subclases: Incubar con IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-570 nm
Plantilla placa:
Resultado:
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| A | 0,093 | 0,146 | 0,056 | 0,732 | 0,077 | 0,077 |
| B | 0,101 | 0,086 | 0,072 | 0,152 | 0,054 | 0,063 |
| C | 0,995 | 0,099 | 0,254 | 0,406 | 0,068 | 0,18 |
| D | 0,12 | 0,076 | 0,153 | 0,082 | 0,048 | 0,149 |
| E | 0,545 | 0,078 | 0,051 | 0,145 | 0 | 0,063 |
| F | 0,115 | 0,057 | 0,07 | 0,074 | 0 | 0,038 |
| G | 0,261 | 0,06 | 0,478 | 0,098 | 0 | 0,451 |
| H | 0,07 | 0,047 | 0,043 | 0,063 | 0 | 0,03 |
