2024.02.08- ELISA CNTN1- Muestras Austria

Muestras:

1. C18.1 (C166/13) – totales
2. C19.1 (C3097/18) – totales
3. C21.1 (C5041/19) – titulación
4. C23.1 (C7373/20) – titulación
5. C24.1 (C1290/23) – titulación
6. C33.1 subclases

Protocolo:

• Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
• Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% –> 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente). Calculamos aprox 40 ml de leche + 2g de leche.
• Titulación sueros: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300)
• Incubar con los sueros 1h
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 45min con anticuerpo secundario:
  • Titulaciones: RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% –> 100 ul/pozo
  • Subclases: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1% –> 100 ul/pozo
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 5min con TMBà 100 ul/pozo
• Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
• Leer a 450-570 nm

Resultados:

1. C18.1 (C166/13) – repetir
2. C19.1 (C3097/18) – negativo
3. C21.1 (C5041/19) – 1/8100
4. C23.1 (C7373/20) – 1/2700
5. C24.1 (C1290/23) – 1/2700
6. C33.1 subclases — IgG1 (revisamos los resultados de Cinta de hace un tiempo y también le salió IgG1).