Objetivo: ver cómo va la mielinización de los co-cultivos de médula, para saber si tengo que hacer la inmuno de las médulas incubadas con sueros des de el día 09/01.
Probar ICC triple en co-cultivos DRG
Protocolo ICC cels fijadas: entre cada paso hacer lavados con PBS1x
- Fijar con PFA4% 20min
- Permeabilizar 10min con metanol -20ºC
- Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5%: 2h a RT (los pongo juntos)
- anti–Caspr1 (ab34151) 1/100
- anti-MBP (808401) 1/100
- anti-panNF (AF3235) 1/100
- Incubar con anticuerpos secundarios: GAM647, GAR488, GAC594 diluídos 1/500 en Goat serum 5%: 1h RT.
- Montar con Fluoromount
Resultado:
- Co-cultivos DRG: la ICC triple sale muy bien!
- Co-cultivos médula: casi no hay mielina
