Objetivo: ver cómo de diferenciados están los co-cultivos de médula para compararlos con cómo estén más adelante (a partir de hoy las células van a crecer con sueros de pacientes en el medio)
Protocolo cels fijadas: entre cada paso hacer lavados con PBS1x
- Fijar con PFA4% 20min
- Permeabilizar 10min con metanol -20ºC
- Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5%: 2h a RT (los pongo juntos)
- anti–Caspr1 (ab34151) 1/300
- anti-MBP (808401) 1/300
- Incubar con anticuerpos secundarios GAR488 + GAM594 diluídos 1/500 en Goat serum 5%: 1h RT
- Montar con Fluoromount
Resultado: hay muy poca mielina, aunque los cultivos están mielinizando correctamente.
