2023.11.30: ICC CASPR1 y doble CNTN1/CASPR1

*Se usan dos portas transfectados durante 2 días (uno para hacer ICC en cels vivas y otro para hacer ICC en cels fijadas)

Muestras:

1. 23-2-1110
2. 23-2-1331
3. 136-8
4. Cneg

Protocolo cels vivas: se hacen lavados con PBS1x entre cada paso. No pongo anticuerpo comercial porque así no hay cruce de canales

• Incubar con suero 1/100 diluídos en medio HEK293: 1h a 37ºC
• Fijar 10min con PFA 4%
• Bloquear con Goat serum 5%: 1h RT
• Incubar con anticuerpos secundario  GAH594IgG diluído  1/500 en Goat serum 5%: 1h RT
• Montar con Fluoromount

Protocolo cels fijadas:

• Fijar 10min con PFA 4%
• Bloquear con Goat serum 5%: 30min RT
• Incubar con suero 1/100 diluído en Goat serum 5%: 1h a RT
• Incubar con anticuerpo anti-CASPR1(ab34151)  diluído 1/1000 en Goat serum 5%: 1h a RT
• Incubar con anticuerpos secundarios  GAH594IgG + GAR488 diluídos  1/500 en Goat serum 5%: 1h RT
• Montar con Fluoromount

Resultado: la immuno en céls vivas ha salido muy bien (importante no poner anticuerpo comercial!!!), se ve muy claramente la positividad. En cambio, en las cels fijadas no se distinguen tan bien los positivos de los negativos (aunque también ha salido)

1. 23-2-1110: Caspr1 neg, doble CNTN1/Caspr1 pos
2. 23-2-1331: Caspr1 neg, doble CNTN1/Caspr1 pos
3. 136-8: Caspr1 neg, doble CNTN1/Caspr1 pos
4. Cneg: todo negativo