Muestras:
- 23-2-1110: subclases CASPR1
- 23-2-1183: muestra panNF+. Titulación y subclases NF155, y confirmación NF186
Protocolo:
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Diluir los sueros:
- Titulación: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300)
- Subclases y screening: diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
- Incubar con los sueros 1h a RT
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Ac secundarios:
- Titulación / screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
- Subclases: Incubar con MAH HRP* IgG1 o IgG2 o IgG3 o IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1%: 100 ul/pozo, 45 min
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-570 nm
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 23-2-1110 IgG1 | Cneg IgG4 | Cneg | 23-2-1183 1/900 | 23-2-1183 IgG1 | Cneg | ||||||
| B blanc | 23-2-1110 IgG1 | Cneg IgG4 | Cneg | 23-2-1183 1/900 | 23-2-1183 IgG1 | Cneg | ||||||
| C prot | 23-2-1110 IgG2 | Cpos CASPR1 22-2-374 IgG3 | Cpos NF155 IgGtot | 23-2-1183 1/2700 | 23-2-1183 IgG2 | Cpos NF186 | ||||||
| D blanc | 23-2-1110 IgG2 | Cpos CASPR1 22-2-374 IgG3 | Cpos NF155 IgGtot | 23-2-1183 1/2700 | 23-2-1183 IgG2 | Cpos NF186 | ||||||
| E prot | 23-2-1110 IgG3 | Cpos CASPR1 22-2-374 IgG4 | 23-2-1183 1/100 | 23-2-1183 1/8100 | 23-2-1183 IgG3 | 23-2-1183 | ||||||
| F blanc | 23-2-1110 IgG3 | Cpos CASPR1 22-2-374 IgG4 | 23-2-1183 1/100 | 23-2-1183 1/8100 | 23-2-1183 IgG3 | 23-2-1183 | ||||||
| G prot | 23-2-1110 IgG4 | 23-2-1183 1/300 | 23-2-1183 1/24300 | 23-2-1183 IgG4 | ||||||||
| Hblanc | 23-2-1110 IgG4 | 23-2-1183 1/300 | 23-2-1183 1/24300 | 23-2-1183 IgG4 |
CASPR1 NF155 NF186
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 0,037 | 0,141 | 0,053 | 0,082 | 0,036 | 0,057 | ||||||
| B blanc | 0,013 | 0,015 | 0,011 | 0,01 | 0,013 | 0,043 | ||||||
| C prot | 0,018 | 0,063 | 1,081 | 0,016 | 0,014 | 0,712 | ||||||
| D blanc | 0,025 | 0,014 | 0,036 | 0,009 | 0,011 | 0,029 | ||||||
| E prot | 0,014 | 0,214 | 0,255 | 0,014 | 0,013 | 0,925 | ||||||
| F blanc | 0,016 | 0,042 | 0,03 | 0,013 | 0,011 | 0,068 | ||||||
| G prot | 0,037 | 0,079 | 0,011 | 0,54 | ||||||||
| Hblanc | 0,041 | 0,021 | 0,022 | 0,039 |
Resultado:
- 23-2-1110: subclases CASPR1 no salen!!!: repetir!!
- Me sorprende que la Bocanegra (22-2-374) sea muy poco positiva por IgG4.
- 23-2-1183: título NF155 1/900, subclase predominante IgG4. NF186 claramente positiva: repetir titulación con NF186!!
