1 culture slide transfectado día 05/09 (fijado con PFA 4% 10min, y congelado a -80ºC)
- Pozos 1-4: transfectados con MBP (para probar si el ac.anti-MBP que uso en los co-cultivos funciona bien)
- Pozos 5-8: transfectados con GlialCAM (para probar si el ac.anti-cmyc funciona bien)
Protocolo:
- Descongelar culture slide con PBS1x
- Permeabilizar 5min con tritón 0,3% en PBS1x
- 1 lavado con PBS1x
- Bloquear con Goat serum 5%: 1h a RT
- Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5%:
- Pozos 1 y 2: MBP (anti-Myelin basic protein SMI99, 808401 Biolegend) Dil. 1/100 (mouse): 1h RT
- Pozos 3 a 8: c-myc dil. 1/100 (mouse): 1h RT
- 3 lavados con PBS1x
- Incubar 1h con Ac. secundarios diluídos en Goat serum 5%: GAM488 1/500
- 3 lavados con PBS1x
- Montar con Fluoromount
Resultado: tanto el MBP como el c-myc se ven muy bien (glialCAM se transfecta perfectamente)
