Cojo cubres de todas las condiciones para ir viendo cómo va la diferenciación.
Protocolo:
- Fijar 20 min con PFA 4%
- 1 lavado con PBS1x
- Bloquear con Goat serum 5% y 0’5% tritón (en PBS): 1h a RT
- Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5% y 0’5% tritón (en PBS):
- MBP y NFh:
- anti-Myelin basic protein SMI99, 808401 (Biolegend). Dil. 1/100 (mouse) : 3h RT
- anti-Neurofilament H, AB5539 (Merck) Dil. 1/500 (chicken) : 1h RT
- MBP y NFh:
- 3 lavados con PBS1x
- Incubar 1h con Ac. secundarios diluídos en Goat serum 5% y 0’5% tritón (todos a 1/500)
- MBP y NFh: GAM594 + GAC488
- 3 lavados con PBS1x
- Montar con Fluoromount
Resultado: aunque el NFh se ve muy bien,en ninguno de los cubres hay mielina: tiro los explantes de DRG del día 01/06/2023!!
Tengo que comprobar que el anticuerpo anti-MBP funcione correctamente.