Objetivo: pasar 50 muestras de LCR de pacientes EM en HEKs transfectadas con GlialCAM vivas. REPETICIÓN DE DÍA 29/08/23
Muestras: LCR de EM
- EM-339
- EM-349
- EM-353
- EM-354
- EM-357
- EM-358
- EM-336
- EM-363
- EM-364
- EM-373
- EM-332
- EM-333
- EM-335
- EM-340
- EM-405
- EM-382
- EM-384
- EM-411
Protocolo cels vivas (sin fijar):
- Incubar con suero 1/100 o LCR 1/10 en medio HEK293 (1h a 37ºC): preparar 250 ul de cada muestra para cubrir el pozo (en el primer pozo poner solamente medio, en los otros 7 normal)
- 3 lavados con PBS1x
- Fijar 10 min con PFA4%
- 1 lavado con PBS1x y quitar la pieza de los culture slides
- Permeabilizar 5min con tritón 0,3% (en PBS1x)
- 1 lavado con PBS1x
- Incubar con anticuerpo comercial anti-CMYC diluído 1/200 en goat serum 5% (1h a RT) (solamente añadiremos el anticuerpo comercial en el primer pozo y en los otros pondremos solamente goat serum 5%)
- 3 lavados con PBS1x
- Incubar con Ac.secundarios GAM488 + GAH594 diluídos 1/750 en goat serum 5% (1h a RT) (el GAM488 solamente en el primer pozo, en los otros solo GAH594)
- 3 lavados PBS1x
- Montar con Fluoromount
Resultado: no se ven células!!! REPETIR
*Descubro que Gemma ha lavado las células vivas con agua destilada y no con PBS1x (no le han añadido el PBS10x al agua de cultivos)
