Muestras:
- C1.1
- C2.1
- C3.1
- C3.2
- C5.1
- C8.1
- C10.1
- C11.1
- C13.1
Protocolo:
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% à 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente). Calculamos aprox 40 ml de leche + 2g de leche.
- Suero 1/100 en leche
- Incubar con los sueros 1h
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 45min con anticuerpo secundario:
- RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo
- IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) à 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-570 nm
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | C1.1 IgGT | IgG4 | IgG3 | IgG2 | IgG1 | C5.1 IgGT | IgG4 | IgG3 | IgG2 | IgG1 | C13.1 IgGT | IgG4 |
| B blanc | ||||||||||||
| C prot | IgG1 | C2.1 IgGT | IgG4 | IgG3 | IgG2 | IgG1 | C8.1 IgGT | IgG4 | IgG3 | IgG2 | IgG1 | C NEG |
| D blanc | ||||||||||||
| E prot | IgG2 | IgG1 | C3.1 IgGT | IgG4 | IgG3 | IgG2 | IgG1 | C10.1 IgGT | IgG4 | IgG3 | IgG2 | |
| F blanc | ||||||||||||
| G prot | IgG3 | IgG2 | IgG1 | C3.2. IgGT | IgG4 | IgG3 | IgG2 | IgG1 | C 11.1 IgGT | IgG4 | IgG3 | |
| H blanc |
Resultados:
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 1,113 | 1,068 | 0,117 | 0,555 | 0,179 | 1,248 | 1,122 | 0,085 | 0,437 | 0,095 | 1,332 | 1,472 |
| B blanc | 0,069 | 0,045 | 0,06 | 0,272 | 0,022 | 0,167 | 0,024 | 0,054 | 0,169 | 0,061 | 0,144 | 0,054 |
| C prot | 0,211 | 1,095 | 1,291 | 0,09 | 0,355 | 0,101 | 1,052 | 1,18 | 0,044 | 0,927 | 0,324 | 0,119 |
| D blanc | 0,07 | 0,076 | 0,08 | 0,111 | 0,143 | 0,077 | 0,085 | 0,038 | 0,103 | 0,166 | 0,051 | 0,136 |
| E prot | 0,363 | 0,105 | 1,344 | 1,134 | 0,082 | 0,688 | 0,102 | 1,208 | 0,957 | 0,076 | 1,119 | 0,005 |
| F blanc | 0,096 | 0,052 | 0,148 | 0,055 | 0,051 | 0,162 | 0,064 | 0,157 | 0,077 | 0,076 | 0,254 | 0,005 |
| G prot | 0,046 | 0,449 | 0,271 | 1,108 | 1,022 | 0,079 | 0,541 | 0,081 | 1,261 | 1,427 | 0,113 | 0,005 |
| H blanc | 0,031 | 0,06 | 0,043 | 0,117 | 0,071 | 0,06 | 0,116 | 0,05 | 0,178 | 0,086 | 0,097 | 0,006 |
- C1.1: IgG4>> IgG2> IgG1
- C2.1: IgG4 >> IgG2
- C3.1: IgG4>> IgG2> IgG1
- C3.2: IgG4>> IgG2> IgG1
- C5.1: IgG4>>IgG2
- C8.1: IgG4>> IgG2
- C10.1: IgG4>> IgG2
- C11.1: IgG4>> IgG2
- C13.1 IgG4>IgG2>>IgG1
