Muestras:
- 23-2-813: Titulación NF155
- 23-2-874: Screening CASPR1
- 23-2-875: Screening CASPR1
- 22-2-374: CASPR1+. Hacer CASPR1 con IgG totales y con subclases.
- 136-08: CASPR1+. Hacer CASPR1 con IgG totales y con subclases.
- 23-2-656: CASPR1+. Hacer CASPR1 con IgG totales y con subclases.
Protocolo:
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Diluir los sueros:
- Titulación: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300)
- Subclases: diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
- Incubar con los sueros 1h
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Ac secundarios:
- Titulación / screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
- Subclases: Incubar con MAH HRP IgG1 o IgG2 o IgG3 o IgG4 1/1000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% (Las subclases IGg2 e IgG3 son nuevas!!!): 100 ul/pozo, 45 min
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-570 nm
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | Cneg | 23-2-813 1/900 | Cneg | 22-2-374 IgG tot | 22-2-374 IgG4 | 136-8 IgG3 | 23-2-656 IgG2 | |||||
| B blanc | Cneg | 23-2-813 1/900 | Cneg | 22-2-374 IgG tot | 22-2-374 IgG4 | 136-8 IgG3 | 23-2-656 IgG2 | |||||
| C prot | Cpos NF155 | 23-2-813 1/2700 | Cpos CASPR1 | 22-2-374 IgG1 | 136-8 IgGtot | 136-8 IgG4 | 23-2-656 IgG3 | |||||
| D blanc | Cpos NF155 | 23-2-813 1/2700 | Cpos CASPR1 | 22-2-374 IgG1 | 136-8 IgGtot | 136-8 IgG4 | 23-2-656 IgG3 | |||||
| E prot | 23-2-813 1/100 | 23-2-813 1/8100 | 23-2-874 1/100 | 22-2-374 IgG2 | 136-8 IgG1 | 23-2-656 IgGtot | 23-2-656 IgG4 | |||||
| F blanc | 23-2-813 1/100 | 23-2-813 1/8100 | 23-2-874 1/100 | 22-2-374 IgG2 | 136-8 IgG1 | 23-2-656 IgGtot | 23-2-656 IgG4 | |||||
| G prot | 23-2-813 1/300 | 23-2-813 1/24300 | 23-2-875 1/100 | 22-2-374 IgG3 | 136-8 IgG2 | 23-2-656 IgG1 | ||||||
| Hblanc | 23-2-813 1/300 | 23-2-813 1/24300 | 23-2-875 1/100 | 22-2-374 IgG3 | 136-8 IgG2 | 23-2-656 IgG1 |
NF155 CASPR1
Resultado:
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 0,114 | 0,093 | 0,077 | 0,436 | 0,068 | 0,458 | 0,088 | |||||
| B blanc | 0,169 | 0,163 | 0,141 | 0,141 | 0,071 | 0,245 | 0,188 | |||||
| C prot | 0,131 | 0,154 | 0,824 | 0,425 | 0,558 | 0,162 | 0,14 | |||||
| D blanc | 0,13 | 0,138 | 0,155 | 0,083 | 0,118 | 0,077 | 0,116 | |||||
| E prot | 0,101 | 0,151 | 0,137 | 0,088 | 0,147 | 0,367 | 0,059 | |||||
| F blanc | 0,135 | 0,129 | 0,145 | 0,098 | 0,08 | 0,147 | 0,078 | |||||
| G prot | 0,122 | 0,132 | 0,206 | 0,206 | 0,164 | 0,056 | ||||||
| Hblanc | 0,076 | 0,106 | 0,07 | 0,073 | 0,05 | 0,053 |
El ELISA de NF155 no ha salido bien, y el de CASPR1 ha salido unpoco bajo, pero lo doy por bueno.
- 23-2-813: No sale bien el ELISA de NF155 (no sale ni el control!!)
- 23-2-874: CASPR1 neg
- 23-2-875: Repetir CASPR1.
- 22-2-374: CASPR1+. Subclases IgG1>>IgG3 (resultado diferente al que salió anteriormente, que era IgG1, IgG4>IgG3)
- 136-08: CASPR1+. Subclases IgG3, IgG4 > IgG2 (resultado diferente al que salió en el paper de Elba del CASPR1, que era IgG3>>IgG4, IgG1)
- 23-2-656: CASPR1+. Subclases no salen!!!!
