PROTOCOL
ELISA anti-MAG
TODOS LOS REACTIVOS VIENEN CON EL KIT
- Diluir las muestras 1/1000 con tampón de incubación. Mezclar con vórtex e incubar las muestras diluídas 1 hora a temperatura ambiente.
- *Durante este tiempo, preparar el tampón de lavado (1/10 en agua destilada) y ponerlo en la nevera
- Poner las muestras y los controles y calibradores 10 min en hielo
- Coger los pozos necesarios de la placa à tener en cuenta que cada muestra se hace por duplicado, y se necesitan 8 pozos para los controles y calibradores:
- A: blanco (tampón de incubación)
- B: calibrador A
- C: calibrador B
- D: calibrador C
- E: calibrador D
- F: control bajo (kit)
- G: control alto (kit)
- H: control positivo (suero positivo)
- Lavar los pozos 4 veces con tampón de lavado frío à poner 300 ul de tampón en cada pozo (lavar con multicanal)
- Añadir 100 ul de cada muestra (y controles y calibradores) en los pozos correspondientes
- Cubrir la placa con un sellador de placa (plástico del kit) e incubar 2h a 4ºC
- Lavar los pozos 4 veces con tampón de lavado frío à poner 300 ul de tampón en cada pozo (lavar con multicanal)
- Añadir 100 ul del Ac secundario IgM (kit) a todos los pocillos à cubrir la placa con sellador e incubar 2h a 4ºC
- Sacar el TMB de la nevera (kit) para atemperarlo
- Lavar los pozos 4 veces con tampón de lavado frío à poner 300 ul de tampón en cada pozo (lavar con multicanal)
- Añadir 100 ul de TMB atemperado a cada pocillo e incubar 30 min a temperatura ambiente
- Añadir 100 ul de solución de parada a cada pocillo
- Leer la placa a 450 nm
- Se calculan los títulos poniendo las OD en la hoja de trabajo anti-MAG de Immuno: si los títulos son de menos de 1000 BTU, se considera negativo
