2023.06.15: ICC explantes médula (día 35 – rata 11/05/2023, y día 14 – rata 01/06/2023)

Uso 2 tipos diferentes de cubres:

• Cubres placa 24w rata 11/05/2023 (explantes médula)
• Cubres placa 60cc rata 01/06/2023 (explantes médula)

Muestras:

1. CIDP78 (MRVM 1ª muestra , LIF+ CASPR1+)
2. CIDP16
3. CIDP21
4. CIDP44
5. Cneg 202-2

Protocolo:

• Incubar con suero 1/70 en medio de mielinización: overnight  37ºC
  • No he hecho lavado con PBS
• Fijar 20 min con PFA 4%
• 1 lavado con PBS1x
• Bloquear 30min con Goat serum 5% tritón 0,5%
• Incubar con anticuerpo primario diluído en Goat serum 5% tritón 0’5% (2h RT)
  • Cubres 1-3: NFh 1/500
• • Cubres 4-5: MBP 1/100
• 3 lavados con PBS1x
• Incubar 1h con Ac. secundarios diluídos en Goat serum 5% tritón 0’5% (todos a 1/500:
  • Cubres 1-3: GAH488 IgG + GAC594
• • Cubres 4-5: GAH488 IgG + GAM594
• 3 lavados con PBS1x
• Montar con fluoromount

Resultado explantes médula 11/05: Los explantes de médula del 11/05 (crecidos en placa de 24w) se ben muy bien y hay mucha mielina. FOTOS!

1. CIDP78 (MRVM 1ª muestra , LIF+ CASPR1+): n-
2. CIDP16: repetir
3. CIDP21: n-
4. CIDP44: n+++ (hay mucha mielina!)
5. Cneg 202-2: repetir

Resultado explantes médula 01/06: Los explantes de médula del 01/06 (crecidos todos juntos en placa 60cc) no se ven tan bien porque hay muchas células

1. CIDP78 (MRVM 1ª muestra , LIF+ CASPR1+): n-
2. CIDP16: n- (creo que marca las cels de Schwann)
3. CIDP21: n-
4. CIDP44: n+++, no se ve bien la mielina
5. Cneg 202-2: repetir