Muestras:
- C30.1
- C30.2
- C9.1
- C9.2
- C9.3
- C9.5
- C11.1
- C13.1
Protocolo
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% — 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente). Calculamos aprox 40 ml de leche + 2g de leche.
- Titulación sueros: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300)
- Incubar con los sueros 1h
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 45min con anticuerpo secundario: RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) à 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-620 nm
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | C30.1 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C9.1 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C9.3 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C11.1 1/100 | 1/8100 | 1/900 |
| B blanc | ||||||||||||
| C prot | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 |
| D blanc | ||||||||||||
| E prot | 1/900 | C30.2 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C9.2 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C9.5 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C13.1 1/100 | 1/8100 |
| F blanc | ||||||||||||
| G prot | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 |
| H blanc |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 0,406 | 0,119 | 0,137 | 1,111 | 0,31 | 0,283 | 0,273 | 0,217 | 0,292 | 0,779 | 0,282 | 0,23 |
| B blanc | 0,134 | 0,145 | 0,199 | 0,172 | 0,153 | 0,19 | 0,247 | 0,236 | 0,197 | 0,248 | 0,296 | 0,3 |
| C prot | 0,404 | 0,177 | 0,138 | 1,167 | 0,292 | 0,336 | 0,275 | 0,394 | 0,331 | 0,569 | 0,404 | 0,351 |
| D blanc | 0,1 | 0,158 | 0,194 | 0,132 | 0,183 | 0,19 | 0,157 | 0,171 | 0,202 | 0,268 | 0,229 | 0,298 |
| E prot | 0,225 | 0,148 | 0,175 | 0,484 | 0,364 | 0,17 | 0,196 | 0,251 | 0,216 | 0,277 | 0,387 | 0,55 |
| F blanc | 0,107 | 0,134 | 0,168 | 0,182 | 0,195 | 0,216 | 0,122 | 0,157 | 0,249 | 0,19 | 0,209 | 0,473 |
| G prot | 0,254 | 0,148 | 0,154 | 0,457 | 0,298 | 0,163 | 0,114 | 0,181 | 0,177 | 0,247 | 0,207 | 0,176 |
| H blanc | 0,142 | 0,123 | 0,11 | 0,159 | 0,105 | 0,121 | 0,092 | 0,124 | 0,193 | 0,171 | 0,214 | 0,147 |
Resultados
- C30.1 à 1/2700
- C30.2 à neg
- C9.1 à >1/24300
- C9.2 à 1/2700
- C9.3 -à 1/300
- C9.5 à 1/100
- C11.1à >1/24300
- C13.1 à 1/8100
