2023.05.12: ICC co-cultivos (día 50 – rata 23/03/2023)

Cojo 1 cubre de los co-cultivos para ir viendo cómo va la diferenciación

Protocolo:

• Fijar 20 min con PFA 4%
• 1 lavado con PBS1x
• Bloquear con Goat serum 5% y 0’5% tritón (en PBS): 1h a RT
• Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5% y 0’5% tritón  (en PBS):
  • MBP y NF200: 1 h a Tamb
    • MBP: anti-Myelin basic protein SMI99, 808401 (Biolegend). Dil. 1/100 (mouse)
    • NF200: anti-Neurofilament200, N4142 (Merck). Dil. 1/50 (rabbit)
• 3 lavados con PBS1x
• Incubar 1h con Ac. secundarios diluídos en Goat serum 5% y 0’5% tritón (todos a 1/500) : GAR488 (Nf200) + GAM594  (MBP)
• 3 lavados con PBS1x
• Montar con Fluoromount

Resultado: no se ve mielina!!!