Cojo 1 cubre de los co-cultivos para ir viendo cómo va la diferenciación
Protocolo:
- Fijar 20 min con PFA 4%
- 1 lavado con PBS1x
- Bloquear con Goat serum 5% y 0’5% tritón (en PBS): 1h a RT
- Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5% y 0’5% tritón (en PBS):
- MBP y NF200: 1 h a Tamb
- MBP: anti-Myelin basic protein SMI99, 808401 (Biolegend). Dil. 1/100 (mouse)
- NF200: anti-Neurofilament200, N4142 (Merck). Dil. 1/50 (rabbit)
- MBP y NF200: 1 h a Tamb
- 3 lavados con PBS1x
- Incubar 1h con Ac. secundarios diluídos en Goat serum 5% y 0’5% tritón (todos a 1/500) : GAR488 (Nf200) + GAM594 (MBP)
- 3 lavados con PBS1x
- Montar con Fluoromount
Resultado: se ve un poco de mielina pero todavía demasiado poca.