ABSORCIÓN 8-3-23
- -La absorción en células vivas transfectadas Caspr1/CNTN1 no funcionó a 1:100, pero tampoco con la muestra de MRVM. En este caso no probamos células fijadas porque la inmuno es negativa.
- -12 Pocillos ELISA coating proteína Caspr1 a 5ug (similiar a cuando hacemos ELISA Caspr1)
- -Suero diluído en PBS 1:500 –> volumen total 200ul
- -Incubación 30min/pocillo –> total 6 horas
- -Pocillos controles blancos solo con buffer ELISA (muestra al a misma dilución)
- MUESTRAS
- – BOCANEGRA (22-2-374)
- – MRVM (CIDP 78)
COMPROBACIÓN MEDIANTE ELISA 28-3-23
-Hacemos ELISA con las muestras absorbidas en proteina y blanco, y con la dilución previa a 1:500 y confirmamos que la muestra BOCANEGRA preabsorbida en proteina ha bajado su OD x4, mientras que la absorbida en blanco tiene una OD similiar al a muestra diluida a 1:500
http://s811335031.mialojamiento.es/lab/wp-content/uploads/2023/03/ELISA-ABS-PROT-28.3.23.xls
COMPROGACIÓN MEDIANTE TEASING 29-3-23
Muestras
- BCN abs proteina –> “Cajal bands”
- BCN abs blanco –> “Cajal bands”
- BCN 1:500 en PBS sin abs –> “Cajal bands”
- BCN 1:100 en PBS –> “Cajal bands”
- MRVM 1:100 –> paranodos
- BCN 23-2-271 (muestra Caspr1 negativa post-tratamiento) –> “Cajal bands”
No hago fotos porque el teasing es de mala calidad
CONCLUSIÓN
Todas las muestras de BOCANEGRA (pre-absorbida con Caspr1, no absorbida 1:100, 1:500, muestras post-Rituximab que es Caspr1 negativa) MARCAN las “Cajal Bands”
Mi conclusión es que el marcaje es inespecífico, y queda por resolver si la muestra marca algo (aunque sea tenue) los paranodos
