2023.02.23 ICC co-cultivos (día 21 – rata 02.02.2023)

Cojo 2 cubres de los co-cultivos para ir viendo como va la diferenciación (uno de placa medio mielinización 1, y otro de placa medio de mielinización 2)

Protocolo:

• Fijar 20 min con PFA 4%
• 1 lavado con PBS1x
• Bloquear con Goat serum 5% y 0’5% tritón (en PBS): 1h a RT
• Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5% y 0’5% tritón  (en PBS):
  • MBP y NFh : 1h RT (los pongo los dos juntos)
    • anti-Myelin basic protein SMI99, 808401 (Biolegend). Dil. 1/300 (mouse)
    • anti-Neurofilament H, AB5539 (Merck) Dil. 1/500 (chicken)
• 3 lavados con PBS1x
• Incubar 1h con Ac. secundarios diluídos en Goat serum 5% y 0’5% tritón (todos a 1/500) : GAM488 (NfH) + GAC594  (MBP)
• 3 lavados con PBS1x
• Montar con Fluoromount

Resultado: Todavía no se ve mielina, pero se ven muy bien las neuronas.