Coating and seeding: 28.05.18 [see the post 20180601: ICC HTB-11 neurons (different cell fixation methods) ]
ICC protocol:
- Take 14 coverslips and put them in a 24 well plate
- Patient’s sera diluted 1/100 with differentiation medium
- Fix with PFA 4% (aprox 1 ml/well). Incubation at RT during 20 min.
- Wash with PBS 1x
- Secondary antibody: GAH 488 (IgG or IgM) diluted 1/1000 in Goat Serum 5 %
- Wash with PBS 1x
- Vectashield mounting medium
Samples: the same samples as the day 22.05.18
| Name | ID | IgG/IgM | Result | |
|---|---|---|---|---|
| Sorli Peña, Miguel A. | 18-517 | IgG | CIDP CNTN1 ++ for HTB11 (undifferentiated cells) | |
| Gracia Vicens, JM | 18-518 | IgG | CIDP ++ for HTB11 (undifferentiated cells) | |
| Jalabo Remacha, M.Carmen | 18-526 | IgG | CIDP + for HTB11 (undifferentiated cells) | |
| Prado Pintor, Carmen | 18-561 | IgG | CIDP + for HTB11 (undifferentiated cells) | |
| 102 | IgG | EM + for HTB11 (undifferentiated cells) | ||
| Cussó, Pere | 18-600 | IgG | +++ for DRG neurons (rat) | |
| Cheng Swee Chin | 17-511 | IgG | ++ for DRG neurons (rat) | |
| Simola Jari Olavi | 17-513 | IgG | + for DRG neurons (rat) | |
| 74.09649-SER | 18-596 | IgG | ++ for DRG neurons (rat) | |
| V.Hilton Jane | 18-601 | IgG | - for DRG neurons (rat) | |
| Conchillo Riera, Pere | 15-611 | IgG | NMM | |
| Val Sánchez de León, Leonardo | 09-5162 | IgG | NMM | |
| Marqués Mercadal, Joan Antoni | 196-13 | IgG | NMM | |
| Negative control | IgG |
Results: a totes les mostres es veu autofluorescència degut a què les cèl·lules estan mortes. És possible que es morin degut a la incubació amb els sueros (ja que en la incubació amb anticòs primari això no passa). Aquesta mort pot ser deguda al complement, o a què els receptors Fc de les cèls de neuroblastoma internalitzen les immunoglobulines del sèrum.
