Objectives
To test paraneoplastic neuropathies patients for IgM positivity towards human Piezo 1 in HEK 293 transfected cells.
Patients
- A1) 95-43
- A2)94-292
- A3) 97-543
- A4) 93-40
- A5) 92-147
- A6) 94-55
- B1) 93-38
- B2) 92-133
- B3) 01-848
- B4) 00-1289
- B5) 98-14
- B6) 03-1167
- C1) 04-2
- C2) 13-1127
- C3) 15-2420
- C4) 15-1131
- C5) 11-1167
- C6) 00-307
- D1) 15-2373
- D2) 08-530
- D3) 00-1248
- D4) 90-92
- D5) 04-726
- D6) 92-38
- E1) 98-164
- E2) 03-838
- E3) 05-409
- E4) 04-1323
- E5) 16-3512
- E6) 01-203
- F1) 93-94
- F2) 97-506
- F3) 02-616
- IRB 15-467
- AMC 15-107 (this patient was also tested for IgG staining)
PIEZO 1 ICC
- Human Piezo 1 transfected HEKs 293 grown in coverslips . Fixed with PFA 4% and blocked with 5% goat serum in PBS.
- PBS
- Blocking: 5% goat serum in PBS
- Patient’s sera diluted 1/40 (IgM) with 5% goat serum in PBS.
- Primary Ab: No primary antibody was used as cells incorporated GFP
- Secondary Abs: GAH 594 (1/500) IgM or IgG
- Vectashield mounting medium
RESULTS
Todas las muestras de los pacientes parecen marcar en mayor o menor medida las células, si bien ningún marcaje colocaliza con GFP. A falta de tener un anticuerpo comercial contra Piezo1, para evaluar si este marcaje es inespecífico, se pasarán unos cuantos pacientes por IgM por células HEK transfectadas con cualquier otro antígeno.
Editado 30/06/2017: El marcaje apreciado en el experimento del 29/06/2017 con HEK transfectadas con CNTN2 es el mismo que el visto en la ICC de Piezo 1 por IgM realizada el 23/06/2017. Como consecuencia, se concluye que dicho marcaje se corresponde al propio de las IgM, sin tener ninguna especificidad con el antígeno transfectado en las células HEK.
