Objectives
To test paraneoplastic neuropathies patients for IgG positivity towards human Piezo 1 in HEK 293 transfected cells.
Patients
- A1) 95-43
- A2)94-292
- A3) 97-543
- A4) 93-40
- A5) 92-147
- A6) 94-55
- B1) 93-38
- B2) 92-133
- B3) 01-848
- B4) 00-1289
- D3)00-1248
PIEZO 1 ICC
- Human Piezo 1 transfected HEKs 293 grown in coverslips . Fixed with PFA 4% and blocked with 5% goat serum in PBS. NOTE: Patient 00-1248 (IP) was also tested in Piezo 1 transfected and permeabilized HEK cells.
- PBS
- Blocking: 5% goat serum in PBS
- Patient’s sera diluted 1/100 (IgG) with 5% goat serum in PBS.
- Primary Ab: No primary antibody was used as cells incorporated GFP
- Secondary Abs: GAH 594 (1/500) IgG
- Vectashield mounting medium
RESULTS
Todas las muestras son negativas. Sin embargo, en la muestra D3)00-1248, al jugar con el micrométrico parece que se ven unas células positivas que colocalizan con el marcaje de Piezo 1 asociado a GFP. Para salir de dudas en próximos experimentos se repetirá el ensayo para esta muestra.
