Objectives
Se testan por IgG los sueros de Zika-GBS positivos en las ICC de los dias 15 y 16 ; ZN015a (lab id 44) y ZN005A (lab id num11) en HEK transfectadas con AXL. Se testan ambos sueros sin anticuerpo comercial (ni su secundario) y en células no transfectadas para confirmar la especificidad del marcaje.
Patients
- No se dispone de alícuota de suero de la muestra ZN005A (lab id 11) y por tanto se ha usado una dilución 1/100 de suero en medio de cultivo sobrante de la IP que se realizó con la muestra original
- ZN015a (lab id 44): la muestra se diluye 1/100 en 5% goat serum en PBS.
AXL ICC
- Human AXL transfected HEKs 293 grown in coverslips (plates). Fixed with PFA 4%, permeabilized and blocked with 5% goat serum in PBS.
- PBS
- Blocking: 5% goat serum in PBS
- Patient’s sera diluted 1/100 (IgG) with 5% goat serum in PBS.
- Secondary Abs: GAH 594 (1/500) IgG
- Vectashield mounting medium
Non-transfected HEKs ICC
- Non-transfected HEKs 293 grown in coverslips (plates). Fixed with PFA 4% and blocked with 5% goat serum in PBS.
- PBS
- Blocking: 5% goat serum in PBS
- Patient’s sera diluted 1/100 (IgG) with 5% goat serum in PBS.
- Secondary Abs: GAH 594 (1/500) IgG
- Vectashield mounting medium
RESULTS
- Tal y como vimos en experimentos anteriores, la muestra 11 es claramente positiva para AXL por IgG. Su marcaje no es debido a ninguna interacción con el anticuerpo comercial y tampoco se aprecia en células no transfectadas, confirmando así el marcaje de dicho paciente.
- El marcaje de la muestra 44 sin embargo, aunque perceptible es considerablemente menos intenso. Si bien no se aprecia en absoluto en células no transfectadas, su baja intensidad hace pensar en un positivo dudoso.
