20170515: ICQ motoneuronas IgG e IgM en neuropatias paraneoplasicas+ Zika- GBS + pax unidad

Se analizan por neuronas motoras de rata por  IgG e IgM   algunas de las muestras de neuropatías paraneoplásicas del Hospital Clínic así como algunos pacientes de la unidad y por IgG los pacientes del proyecto Zika-GBS .

Pacientes

IgG

IgM

PROTOCOLO

PRIMARIO:

• Sacar 200ul de medio del propio cultivo y añadirle 2ul (IgG) o 5 (IgM) de suero del paciente en cada uno de los pocillos de placa de 24 donde haremos la inmuno. Mezclar bien con pipeta procurando no hacer espuma y colocar el cubre en el fondo del pocillo de una placa de 24 pocillos vigilando que quede bien cubierto. Incubar 1h a 37ºC (estufa).

FIJADO:

• Vaciar el pocillo  lavar una vez con PBS 1X. Fijar con PFA comercial al 4% (aprox 300ul de PFA/pocillo) 5 min a temperatura ambiente.

• Eliminar el PFA y lavar una vez con PBS 1X.

SEGUNDARIO:

• Eliminar el PBS y añadir 200 mcL de el secundario GAH 488 IgG (caja 25) o GAH 488 IgM (caja 21) 1:1500 en Goat serum al 5%. Incubar 1h a temperatura ambiente.

• Lavar cada cubre con H2O y montarlo sobre un porta con Vectashield.

RESULTADOS

Todas las muestras (salvo el ct positivo de IgG TMF) han sido negativas.