20170508 ICQ motoneuronas rata: pax Zika-GBS (IgG e IgM) + 3 pax clínic IgM

Se analizan por neuronas motoras de rata por  IgM   las muestras de pacientes del proyecto Zika-GBS  así como 3 pacientes  con neuropatías paraneoplásicas del  clínic. También se analizan por IgG dos de las muestras de pacientes del proyecto Zika-GBS que quedaron pendientes en otros experimentos.

Pacientes

PRIMARIO:

• Sacar 200ul de medio del propio cultivo y añadirle 5ul* de suero del paciente en cada uno de los pocillos de placa de 24 donde haremos la inmuno. Mezclar bien con pipeta procurando no hacer espuma y colocar el cubre en el fondo del pocillo de una placa de 12 pocillos vigilando que quede bien cubierto. Incubar 1h a 37ºC (estufa).

* Para la muestra  analizada por IgG (num 47; ZN026A) se ha utilizado 2 mcL de suero en 200 mcl de medio. En el caso del suero 1/40 recuperado de la IP del paciente num 11 (ZN005A) del 2574717, se ha puesto una gota de 50 mcL del suero sin volver a diluirlo sobre el cubre con las motoneuronas.

FIJADO:

• Vaciar el pocillo  lavar una vez con PBS 1X. Fijar con PFA comercial al 4% (aprox 200ul de PFA/pocillo) 5 min a temperatura ambiente.

• Eliminar el PFA y lavar una vez con PBS 1X.

SEGUNDARIO:

• Eliminar el PBS y añadir 200 mcL de el secundario GAH 488 IgM/ IgG  1:1500 en Goat serum al 5%. Incubar 1h a temperatura ambiente.

• Lavar cada cubre con H2O y montarlo sobre un porta con Vectashield.

RESULTADOS